2x Pfu PCR Mix high

Описание и отзывы

Трекер стоимости

Характеристики

Описание продукта:

Pfu 2X Mix-это готовый к использованию раствор, содержащий полимеразу, днтпс, MgSO₄И буфера реакции при оптимальных концентрациях для эффективного усиления шаблонов DNA PCR. Для подготовки окончательного ПЦР добавляются только праймеры и шаблон DNA. Pfu Mix способствует высокому воспроизводимому ПЦР, уменьшая риск ошибки пипетки, просчета и загрязнения. Он также способствует более высокой чувствительности, добавляя усилитель и оптимизатор.

Pfu DNA polymerase, полученная из гипертермической Арчи Pyrococcus furiosus, показана, что обладает превосходными термостойкими и коррективными свойствами по сравнению с другими термостойкими полимеразами. В отличие от ДНК так полимеразы с высокими показателями термоустойчивый Pfu ДНК-полимераза обладает 3 "5" exonuclease корректуры активности, что позволяет полимеразы исправить нуклеиновой кислоты-misincorporation ошибки. Это означает, что Pfu DNA polymerase-генерируемые PCR фрагменты будут иметь меньше ошибок, чем Taq-created PCR вставки. Использование Pfu DNA polymerase в ваших реакциях PCR приводит к тупым продуктам PCR, которые идеально подходят для клонирования в тупые векторы. Pfu DNA polymerase превосходит методы, требующие высококачественного синтеза DNA.

Определение единицы
Одна единица определяется как количество фермента, необходимого для катализирования включения 10 нм dNTPs в кислотно-нерастворимой форме в течение 30 минут при 70 °C с использованием в качестве подложки hering спермы.

2 ×pcr Pfu Mix
20 мм Tris-HCl (pH 8,0), 100 мм KCl , 3 мм MgCl₂, 400 мм dNTPs, 0,1 U/μl Taq DNA Polymerase
Хранить при температуре-20 °C.

Основные шины для легкового автомобиля протокол
1. Добавьте следующие компоненты в стерильную 50 мкл микроцентрифуговую трубку, сидящую на льду:

 

Компоненты	Объем	Конечной концентрации
2 ×pcr Pfu Mix	25 мкл	1 ×
Смесь грунтовки (по 10 мкм каждый)	4 мкл	0,4 мкм каждый
Шаблон ДНК	1-10 мкл	N/a
Нуклеиназы-туалетная вода	До 50 мкл	N/a

2. Смешать содержимое трубки и наложения с 50 мкл минерального или силиконового масла.
3. Пробки и центрифуги для краткого сбора содержимого на дно.
4. Инкубационные трубки в тепловом циклоне при 94 °C в течение 3 минут, чтобы полностью обойти шаблон.
5. Выполните 25-35 циклов усиления ПЦР следующим образом:

 

Шаг	Температура	Продолжительность
Денатурируют	94 °C	45С
Отжиг	55 °C	30С Отсчетом
Расширение	72 °C	1 мин 30 s

6. Инкубация для дополнительного 10 мин при 72 °C и поддерживать реакцию при 4 °C. Образцы могут храниться при температуре-20 °C до использования.

7. Анализируйте продукты усиления путем электрофореза agarose gel и визуализируйте с помощью окрашивания бромидом ethidium. Используйте соответствующие стандарты молекулярной массы.

 

Примечания относительно Велоспорт условия

1. Начальная денатурация может быть выполнена в течение интервала 1-5 мин при 95 °C в зависимости от содержания GC шаблона.

2. Оптимальная температура отжига на 5 °C ниже температуры плавления грунтовки-температуры дуплекса DNA. Если получены неспецифические продукты ПЦР, оптимизация температуры отжига может быть выполнена путем повышения температуры шаг на 1-2 °C.

3. Количество циклов ПЦР зависит от количества шаблона в реакционной смеси и от ожидаемого выхода продукта ПЦР. 25-35 циклов обычно достаточны для большинства реакций ПЦР. Низкое количество пускового шаблона может потребовать 40 циклов.

4. Время последнего шага расширения может быть увеличено для амплитудов, которые будут клонированы в векторов T/A.

 

 

Приложений

Высококачественные шины для легкового автомобиля
Высокая воспроизводимости результатов шины для легкового автомобиля
Шины для легкового автомобиля клонирования
Сайт-направленного мутагенеза

 

Определение единицы
Одна единица определяется как количество фермента, необходимого для катализирования включения 10 нм dNTPs в кислотно-нерастворимой форме в течение 30 минут при 70 °C с использованием в качестве подложки hering спермы.

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Реагенты Dongsheng Biotech PCR ищут дистрибьюторов и предоставляют услуги OEM

Dongsheng Biotech предлагает различные серии продуктов, которые помогут вам достичь успеха PCR. Для ферментов, нашей Taq полимеразе, HS Taq DNA Polymerase, FS Taq DNA Polymerase, Pfu DNA Polymerase и Fusion Pfu DNA Polymerase обеспечивают высокую точность, эффективность, чувствительность PCR производительности. У нас также есть длинная Taq DNA Polymerase для долгой производительности PCR.